需要注意的事项
1.选择生长期活跃的细菌进行染色，老化的革兰氏阳性菌会被染成红色，造成假阴性 。
2.涂片不能太厚，以免脱色不完全造成假阳性 。
3.脱色是革兰氏染色成功的关键 。脱色不足导致假阳性，脱色过度导致假阴性 。
实验过程
1.用纱布擦拭载玻片，用记号笔在载玻片的一侧画一个小圆圈(用来大致确定细菌液滴的位置) 。将涂有细菌的部分放在火焰上烘烤，去除油脂 。
2.诽谤
液体:左手握住菌液试管，打开酒精灯火焰附近约5cm的管盖；右手拿着接种环，在火焰中燃烧灭菌 。冷却后，从试管中取出一圈菌液，在干净无油脂的载玻片上贴上直径约2mm的薄膜，最后将接种圈在火焰中灼烧灭菌 。
【革兰氏染色的注意事项】固体培养基:先在载玻片上滴一滴无菌水，然后用接种环取少量细菌涂在载玻片上，使之变薄、均匀 。
3.风干:让涂片在空气体中自然风干 。
4.固定:保持贴膜朝上，用火焰固定2-3次(最好不要烫手) 。
5.染色:将固定好的涂片放在报纸上，滴草酸铵结晶紫溶液，染色1分钟 。
6.冲洗:用水慢慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干 。简单染色后可观察到细胞形态 。
7.媒染:滴1滴碘溶液，染色1分钟，水洗 。
8.脱色:吸收残留水，连续滴加95%乙醇脱色20-30秒，直至流出液无紫色，立即用水冲洗 。
9.重染:滴加藏红3-5分钟，水洗 。至此，革兰氏染色结束 。
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