28. 大肠杆菌营养缺陷型突变体的筛选方法主要有:(1)平板影印接种法 用该种方法筛选抗药性突变体的方法基本步骤是将野生型大肠杆菌稀释后涂布在不含链霉素的培养基上,是每一细菌都长成一个菌落,然后用一个包有丝绒的木块作为“印章式”的接种工具,其直径较培养皿略小 。
29.经灭菌后,把上述长好的菌落的培养皿倒置在“印章”上,使丝绒上粘上细菌,再将含有链霉素的培养皿翻转在印章上,使其接上细菌,并使两个培养皿的位置互相对应 。
30.经培养后,如在含有链霉素的培养皿长出菌落,表明这菌落对链霉素有抗性 。然后从不含有链霉素的培养皿的相对位置上挑选菌落接种在另一含有链霉素的培养基上,结果也能长出菌落 。
31.该实验表明,细菌对链霉素的抗性 不是接触链霉素之后引起的,而是在接触以前就已经存在了 。如果试验不用链霉素作为选择因子,而改用其他选择因子,也可能选出其他的突变体 。
32. (2)青霉素法 。从一个细菌培养物上,通过诱变剂处理基本培养基上的野生型细菌,可以获得营养缺陷型 。
33.由于营养缺陷型只占细胞总数的很小比例,所以加入青霉素可以容易地把它们筛选出来 。青霉素的作用主要是抑制细菌细胞壁的合成,它只能杀死正在生长繁殖中的细菌,而不能杀死休止状态的细菌 。
34.这样就导致绝大多数野生型细胞的死亡,而突变型细胞在基本培养基上不能生长,因此它们不受青霉素的影响 。如果这一细胞群体经稀释并涂布在包含补充营养物质的基本培养基上,那么一部分尚未杀死的野生型细胞和营养缺陷型细胞都会长成菌落 。
35.当把这些菌落影印接种到补加基本培养基上时,不能生长的菌落就是营养缺陷突变体 。然后,将这种突变体分别接种到某一营养物质的基本培养基上,就可选出某种营养缺陷型 。
36. 二 。真菌营养缺陷型的检出真菌的检出常采用菌丝过滤法 。其步骤是:先用诱变剂处理脉孢菌的分生孢子,然后接种在液体基本培养基中,不断给培养液通气,刺激分生孢子生长,并防止它们相互结合在一起 。
37.大约经过一天的培养,分生孢子萌发,长出菌丝 。然后用棉花把萌发了的分生孢子过滤掉,未萌发的分生孢子则仍留在培养液中 。
38.这些未萌发的分生孢子可能包括3种状况:一是死亡的分生孢子;二是需较长时间萌发的野生型;三是已突变成为营养缺陷型的 。
39.因为缺陷型在基本培养基中不能生长,以后每隔一定时期进行过滤,连续若干次之后,所剩下来的都是缺陷型的或死亡的分生孢子 。
40.对缺陷型分生孢子就可以通过各种补充培养基来鉴定它们对营养物质的需求,以确定它们属于哪一类营养缺陷型 。
41. 三 。果蝇突变的检出当基因在等位上有差异时,可以运用孟德尔遗传的杂交方法检查出某个特定基因的存在 。
42.研究基因突变,就要检测出能产生新的表型效应的不同等位基因,定量地测定新突变 。H 。J 。Muller从D 。
43.melanogaster果蝇的自发突变中建立了一系列品系,作为检出突变的杂交材料,其中最有名的是为检测到果蝇X染色体上的隐性致死突变而精心设计的ClB品系和Muller—5(=“Basc”)或简称为μ Muller—5品系的X染色体上带有B(Bar 棒眼)和ωa(apricot,杏色眼)、sc(scute,小盾片少刚毛),3个基因组合的名称为“Basc” 。
44.此外,X染色体上具有一个重叠倒位,可以有效地抑制Muller—5 的染色体与野生型X染色体的重组 。其基本原理和实验步骤如图所示 。
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