大巴车凌晨2点至5点在高速上必须休息 。根据《道路旅客运输企业安全管理规范》：长途客运车辆凌晨2时至5时停止运行或实行接驳运输，凌晨2点后禁止长途客车从收费站口上高速，对此时间段内正在高速公路上行驶的长途客车就近引导到服务区或客运站停车休息 。从事线路固定的机场、高铁快线以及短途驳载且单程运营里程在100公里以内的客运车辆，在确保安全的前提下，不受凌晨2时至5时通行限制 。
【大巴车几点在高速上必须休息】大巴：
大巴，也称巴士，源于英语中bus的音译，为大型公共汽车 。大巴车应该是9米以上，20座以上；中巴是6-9米，10-19座；6米以下，10座以下的是小巴 。巴士用于交通方便行动，主要应用于长途旅游或单位组织集体外出行动 。世界上比较出名的大巴品牌主要有：奔驰、大宇、沃尔沃、丹尼士、世冠、金龙等 。
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