引物浓度也可影响其稳定性 。建议引物的储存浓度不低于 10 M；实际上，在大多数情况下，100 M 的引物浓度操作更简单 。引物和探针还应分装保存，以减少冻融次数，特别是标记的引物和探针 。最后，TE 缓冲液可形成比水更为稳定的环境 。此外，含有 0.1 mM EDTA 的 TE 缓冲液（标准 TE 中含有 1 mM EDTA）是一种理想的溶液，这是由于一些 PCR 反应对 EDTA 的灵敏度可能有一些残存 。
NTC 扩增当引物二聚体形成时，如果使用与 DNA 双链结合的染料，在 NTC 反应中也可观察到荧光信号 。也存在另一种情况，在存在污染物的情况下，无论是基于探针还是双链 DNA 结合染料的反应，引物二聚体的扩增也会在 NTC 孔中被观察到 。这可能是一种随机事件，并不是所有 NTC 都会出现扩增，通常是由不常见的加样错误引起 。如果在每一个 NTC 反应里都出现扩增，很可能是其中一种或两种试剂被污染了 。
Q：如何防止或去除污染？
1.使用干净的工作台，用带核酸降解试剂的的溶液擦抹工作台面 。
2.用带 dUTP 和 UDG 的反应预混液降解来自前序 PCR 反应的产物，防止前序 PCR 反应的污染 。
3.用新的反应管尽量通过置换不同来源的试剂，发现出现问题的试剂 。
4.在条件允许的情况下，在不同的实验地点建立反应，尤其是当应用质粒作为对照时（质粒可以被很容易扩散并且难以去掉） 。
【引物探针问题 怎样消除引物二聚体】实时荧光定量 PCR 分析优化过程确实需要时间，但是所花的时间是值得的 。这样得出的分析结果不仅具有最高的灵敏度和最大的动态范围，而且准确度高、效率高、重复性好，为实验提供可靠的数据 。
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