【退火温度怎么确定】退火温度确定的计算公式是：4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8） 。退火温度（AnnealingTemperature）是指引物和模板结合时候的温度参数 ， 当50%的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度 。它是影响PCR特异性的较重要因素 。在理想状态下 ， 退火温度足够低 ， 以保证引物同目的序列有效退火 ， 同时还要足够高 ， 以减少非特异性结合 。合理的退火温度从55℃到70℃ 。退火温度一般设定比引物的Tm低5℃ 。
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