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从浙江选考命题角度解读“原生质体”的疑难问题( 二 )

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【分析】如果保持获得原生质体时的渗透压将会阻止细胞的分裂，从而无法获得细胞团 。
4 原生质体何时进行细胞分裂？
原生质体混合物中，一旦把酶洗掉，原生质体立即开始合成新壁 。一般来说，来源于已分化的初始材料，其原生质体相比于未分化材料的原生质体合成细胞壁的能力要弱 。细胞壁的形成与细胞分裂有直接关系，凡是不能再生细胞壁的原生质体也就不能进行正常的有丝分裂 。凡能继续分裂的细胞，经2~3周培养后可长出细胞团 。[4]由此可见，原生质体只有在再生细胞壁后，才能进行细胞分裂 。
【选考真题】（2020年1月浙江选考T29）原生质体在培养过程中，只有重新形成细胞壁 后，才可进行有丝分裂 。
【从浙江选考命题角度解读“原生质体”的疑难问题】【分析】细胞壁的形成直接影响了原生质体的分裂 。不能再生细胞壁的原生质体将难以进行分裂 。
5 原生质体的活性如何鉴定？
原生质体活动检测方法有形态观察法、二乙酸荧光素法、酚藏花红染色法、伊文斯蓝染色法 。①形态观察法 。主要观察原生质体形态及胞内环流 。有活力的原生质体形态规则完整，颜色鲜艳，胞内环流明显；无活力原生质体胞内浑浊，无色泽且透光，胞内环流不显著 。②酚藏花红染色法 。其原理是活性原生质体染色后在荧光显微镜下可观察到红色；而无活性原生质体无色 。③伊文斯蓝染色法 。其原理就是死细胞或受损细胞可吸收伊文斯蓝，而完整活细胞不吸收或积累该物质，④二乙酸荧光素法 。该方法的原理是FDA自由穿越细胞膜，并积累在活细胞中，被活细胞酯酶酶解产生荧光素 。在荧光显微镜下可以观察荧光产生 。而荧光素无法在死细胞中积累 。因此，无活力的原生质体无荧光产生 。[5]由此可见，原生质体的活性可以通过形态观察，着色等方法进行鉴定 。
【选考真题】（2020年1月浙江选考T29）(1)为了获取某植物叶片无菌的原生质体，先将叶片经表面消毒并去除下表皮，再将其置于经灭菌处理的较高渗透压的混合酶液中 。酶解后，经多次离心获得原生质体 。然后测定该原生质体的活性，可采用的方法有染色法，渗透吸水失水 (答出2点即可) 。
【分析】该题中提到的染色法，可以是酚藏花红染色法或伊文斯蓝染色法，也可以参考浙科版教材中“验证活细胞吸收物质的选择性”活动中的红墨水染色法 。还可以用形态观察法，如观察胞质环流的情况 。该题中提到的渗透吸水失水，是参考浙科版教材中“观察洋葱表皮细胞的质壁分离及质壁分离复原”活动，能发生渗透吸水失水的是活细胞 。
参考文献
1.陈劲枫.植物组织培养与生物技术[M].北京：科学出版社，2018:131
2.陈劲枫.植物组织培养与生物技术[M].北京：科学出版社，2018:133
3.李浚明 朱登云.植物组织培养教程（第3版）[M]北京：中国农业大学出版社，2005：189
4.李浚明 朱登云.植物组织培养教程[M]北京：中国农业大学出版社，2005：194-195
5.陈劲枫.植物组织培养与生物技术[M].北京：科学出版社，2018:134


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