3.模板PCR扩增：既然已经提取了病毒RNA直接检测不就可以了吗，为什么还要进行这一步呢？PCR扩增的目的是将微量的RNA经过2的N次方进行放大，这样更便于我们检测目标RNA 。但是，PCR扩增的模板必须是DNA，所以要想检测新冠肺炎病毒RNA，必须先将其反转录（逆转录）为cDNA，然后加入试剂材料让其以2的N次方进行复制 。为了实时动态的检测这一过程，检测者可以在反应体系中加入荧光探针或者荧光染料，随着DNA每复制一次，荧光强度也会随之增加，我们通过检测荧光强度就可以推算出原始RNA的浓度了 。这就是核酸检测的核心技术实时荧光定量PCR 。
（遗传学中心法则）
4.核酸检测结果的解读：荧光定量PCR中一个重要的概念是Ct值，即荧光值达到阈值时候的PCR循环次数，跟初始模板的量呈反比，即Ct值越大病毒的含量就越少，Ct值越小病毒的含量就越大 。与模板起始拷贝数的对数存在线性关系 。我们利用已知起始拷贝数的标准样品就可以描述出标准曲线y=aX+b，y代表Ct值，X为起始拷贝数的对数，a、b为常数 。这样我们只要测出检测样本的Ct值，带入曲线就可以算出病毒的量了 。同样的标本进行2次以上的检测，最后判断检测结果是阳性还是阴性 。
PCR中Ct值的确定
【核酸检测ct值怎么查】在大多数有症状的COVID-19感染者中，鼻咽拭子中的病毒RNA在症状出现的第一天就可以检测到，并在症状出现的第一周内达到高峰 。临床检测时Ct值小于40为PCR阳性 。这种阳性结果从第3周开始下降，随后消失 。然而，重症住院患者的Ct值低于轻症患者的Ct值，并且PCR阳性可持续到发病后3周，而大多数轻症患者会产生阴性结果，PCR阳性结果只反映病毒RNA的存在，并不一定表示存在活的肺炎病毒 。在某些情况下，即使在第一次PCR检测阳性的6周后，RT-PCR仍能检测到病毒RNA 。少数病例在24小时内连续两次PCR检测阴性后也呈阳性 。这些检测结果的不确定性，使得疾病控制和预防中心（CDC）利用“基于症状的策略”来判断新冠肺炎的传染性，如果“在康复后至少3天（72小时）未出现发热且没有使用退烧药物，这才被被定义为退烧，医护人员才可以回到工作岗位 。
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