bradford原理
bradford法原理?
bradford法原理?
bradford法测定蛋白质含量的原理是考马斯亮蓝G250与蛋白质结合可以显色，用分光光度计在吸光度595nm处读数，通过标准蛋白与G250结合显色建立标准曲线，再加待测蛋白与G250结合显色后读数代入标准曲线测定蛋白质含量 。
不利因素主要是特殊蛋白的结构，缓冲液组分中有干扰试剂等 。
双缩脲法和Folin—酚试剂法的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的蛋 。取6支试管分别标号，前5支试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液，最后一支试管加待测蛋白质溶液，不加标准蛋白溶液，每支试管液体总量通过加入蒸馏水补足而保持一致 。
考马斯亮蓝染色法?
考马斯亮蓝染色法，也称Bradford检测法，是目前灵敏度最高的蛋白质测定方法 。其最早是在1976年由Bradford根据蛋白质与染料相结合的原理建立 。
Bradford法原理
在酸性分析试剂溶液中，染料考马斯亮蓝 G-250与蛋白质结合的主要是阴离子形式的蓝色，其最大吸收峰 (λmax)位置在590nm，形成的复合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系 。因此，通过测定染料的蓝色离子态可以定量测定蛋白质，通常测定595nm下的吸光度 。
研究认为染料最容易与蛋白质中的精氨酰和赖氨酰残基结合，由于各种蛋白质中的含量不同，与染料的相互作用有强有弱，导致测定不同蛋白质时偏差较大 。进行了一些改良后，可以克服波动问题，但通常会导致检测更容易受其他化合物的干扰 。
蛋白质的检测最早起源于?
虽然很早之前，诸如“给牲畜喂养奶酪加工分离出的蛋白粉，能让牲畜更为强壮，后来人也开始出这个”这事儿出现得很早，甚至可以追溯到古希腊，但这不能算人发现了蛋白质，他们没有能理解“为什么” 。
所以从近代化学对物质描述的规范上来说，最早的是法国的安东尼奥.弗朗索瓦，他发现酸处理一类物质分子时会令其凝结凝絮(实际上是蛋白质变性)，这些物质来自蛋清，血液，小麦面筋等……当然，他只是发现了这个现象，并没有对蛋白质做出明确定义 。
之后蛋白质作为定义被提出，那就是1838年的瑞典化学家永斯.贝采利乌斯了 。同期荷兰的化学家赫拉尔杜斯.马尔德则发现了所有蛋白质都含有氮，并且鉴定出了蛋白质的降解产物之一---亮氨酸(氨基酸中的一种)
检验蛋白质的方法是双缩脲试剂，但这玩意最初发明不是为了检测蛋白质，是尿素(他脱水缩合后的东西可以令双缩脲试剂变色，后来人们发现蛋白质和这玩意居然有类似结构，然后双缩脲就变成检验蛋白质的玩意了 。) 。
但是实际上后来检验蛋白质有其他方法，譬如检验游离氨基，羧基(必须连a碳)的茚三酮反应，检验肽键(对酚基也有作用)的Folin酚试剂，与蛋白质以范德华力结合生色的考马斯亮蓝反应等 。不同方法是怎么发现的那就啰嗦了，这里就不展开了 。
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