1、母种培养：1、麦芽糖酵母琼脂培养基（MYA）大豆蛋白胨（豆胨）1克、酵母2克、麦芽糖20克、琼脂20克 ， 加水至1000毫升 。2、马铃薯葡萄糖酵母琼脂培养基（PDYA）马铃薯300克（加水1500毫升 ， 煮20分钟 ， 用滤汁）、酵母2克、豆胨1克、葡萄糖10克、琼脂20克 ， 加水至1000毫升 。3、燕麦粉麦芽糖酵母琼脂培养基（DMYA）燕麦粉80克、麦芽糖10克、酵母2克、琼脂20克 ， 加水至1000毫升 。
2、原种和栽培种培养基：1、小麦秆或裸麦秆 ， 切碎（长2—3厘米） ， 泡湿 ， 装瓶 ， 高压灭菌后备用 。2、小麦、裸麦 ， 高粱、玉米、小米等谷粒浸泡 ， 煮透至没有白芯但表皮不破 ， 加2%碳酸钙 ， 装瓶 ， 高压灭菌后备用 。3、木屑和小木片各40%、麸皮20% ， 制作栽培种培养基 。
3、接种：可以用培养3—4天的液体菌种接种 。若用固体菌种必须加大接种量（菌种/培养料） ， 接种量最少10% ， 最好15%—20% 。
【大球盖菇菌种制作】4、培养：接种后 ， 把菌种瓶或袋放在20—28℃培养室中培养 。大球盖菇菌丝生长几天后 ， 菌丝生长速度会逐渐缓慢 ， 加速菌丝生长的方法是搅拌 。用液体菌种接种的无菌麦粒培养基 ， 每隔3—7天摇瓶一次 ， 把菌丝摇断 ， 可以刺激菌丝再生 ， 能保证菌丝生长旺盛 。
