凯氏定氮法的原理是什么
凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法 。即在有催化剂的条件下,用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐,然后在碱性条件下将铵盐转化为氨,随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收,再以标准盐酸滴定,就可计算出样品中的氮量 。由于蛋白质含氮量比较恒定,可由其氮量计算蛋白质含量,故此法是经典的蛋白质定量方法 。蛋白质是含氮的有机化合物 。蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵 。然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,并
凯氏定氮法原理是什么?凯氏定氮法原理是:
蛋白质是含氮的有机化合物 。蛋白质与浓硫酸和催化剂一同加热硝化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵 。然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定 , 根据酸的消耗量乘以换算系数 , 并换算成蛋白质含量 。含氮量*6.25=蛋白含量 。
凯氏定氮法的注意事项:
1、样品应是均匀的 。固体样品应预先研细混匀,液体样品应振摇或搅拌均匀 。
2、样品放入定氮瓶内时 , 不要沾附颈上 。万一沾附可用少量水冲下,以免被检样消化不完全,结果偏低 。
3、消化时如不容易呈透明溶液,可将定氮瓶放冷后,慢慢加入30%过氧化氢(H2O2)2-3ml,促使氧化 。
4、在整个消化过程中,不要用强火 。保持和缓的沸腾,使火力集中在凯氏瓶底部,以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下,使氮有损失 。
凯氏定氮法是什么滴定方法凯氏定氮法
蛋白质测定的国标规定方法——凯氏定氮法介绍
【GB/T 5009.5—1985】
食品中蛋白质的测定方法
本标准适用于各类食品中蛋白质的测定.
1 原理
蛋白质是含氮的有机化合物.食品与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵.然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即为蛋白质含量.
2 试剂
所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制.
2.1 硫酸铜.
2.2 硫酸钾.
2.3 硫酸.
2.4 2%硼酸溶液.
2.5 混合指示液:1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合.也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合.
【凯氏定氮法原理是什么,凯氏定氮法的原理是什么】2.6 40%氢氧化钠溶液.
2.7 0.05N硫酸标准溶液或0.05N盐酸标准溶液.
3 仪器
定氮蒸馏装置:如图所示.
(图略)
4 操作方法
4.1 样品处理:精密称取0.2.0g固体样品或2~5g半固体样品或吸取10~20ml液体样品(约相当氮30~40mg),移入干燥的 100ml或500ml定氮瓶中,加入0.2g硫酸铜,3g硫酸钾及20ml硫酸,稍摇匀后于瓶口放一小漏斗,将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上.小心加热,待内容物全部炭化,泡沫完全停止后,加强火力,并保持瓶内液体微沸,至液体呈蓝绿色澄清透明后,再继续加热0.5h.取下放冷,小心加20ml 水.放冷后,移入100ml容量瓶中,并用少量水洗定氮瓶,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀备用.取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸按同一方法做试剂空白试验.
4.2 按图装好定氮装置,于水蒸气发生瓶内装水至约2/3处,加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸,以保持水呈酸性,加入数粒玻璃珠以防暴沸,用调压器控制,加热煮沸水蒸气发生瓶内的水.
4.3 向接收瓶内加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示液1滴,并使冷凝管的下端插入液面下,吸取10.0ml样品消化稀释液由小玻杯流入反应室,并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内,塞紧小玻杯的棒状玻塞.将10ml 40%氢氧化钠溶液倒入小玻杯,提起玻塞使其缓缓流入反应室,立即将玻塞盖紧,并加水于小玻杯以防漏气.夹紧螺旋夹,开始蒸馏.蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内,蒸馏5min.移动接受瓶,使冷凝管下端离开液面,再蒸馏1min.然后用少量水冲洗冷凝管下端外部.取下接收瓶,以0.05N硫酸或0.05N盐酸标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点.
同时吸取10.0ml试剂空白消化液按4.3操作.
4.4 计算
式中:X——样品中蛋白质的含量,%;
V1——样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积,ml;
V2——试剂空白消耗硫酸或盐酸标准液的体积,ml;
N——硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度;
0.014——1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数;
m——样品的质量(体积),g(ml);
F——氮换算为蛋白质的系数.蛋白质中的氮含量一般为15~17.6%,按16%计算乘以6.25即为蛋白质,乳制品为6.38,面粉为5.70,玉米、高粱为6.24,花生为5.46,米为5.95,大豆及其制品为5.71,肉与肉制品为6.25,大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83,芝麻、向日葵为 5.30.
附加说明:
本标准由全国卫生标准技术委员会食品卫生标准分委员会提出,由卫生部食品卫生监督检验所归口.
本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草.
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