怎么看懂液相色谱图 高效液相色谱图解读

概述:液相色谱法是一种以液体为流动相的柱色谱分离与分析技术,于20世纪70年代建立起来的 。相对于以气体为流动相的气相色谱而言,以液体为流动相的任何一种色谱过程均称为液相色谱 。由于液相色谱法高效、快速,之后得到迅速的发展,在经典的液相色谱法的基础上,吸收了气相色谱法的理论和实践技术,并采用高压输液泵、高效固定相和高灵敏度检测器等装置,实现了分析速度快、分离效率高和操作自动化,这种柱色谱技术成为高效液相色谱法,又称为高压液相色谱法 。
高效液相色谱仪
流动相的差异决定了液相色谱仪和气相色谱仪的不同 。高效液相色谱仪包括高压输液泵、梯度淋洗装置、进样装置、色谱柱、检测器和记录系统等主要部件,其工作流程:贮液器中储存的流动相经高压泵送到色谱柱冲洗柱子,当柱子平衡而且基线平稳后,试样通过注射器进入进样器,然后由流动相把试样送到色谱柱中进行分离,分离后的组分由检测器检测,输出的信号通过放大器放大后用记录仪记录下来 。

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高压输液泵
用来输送流动相,应具备流量稳定而而且无脉动,并有较大的调节范围,因为流量不仅影响柱效能,还直接影响峰面积的重现性和保留值的准确性等,且流动相的压力平衡可使检测器噪声降低 。此外还应具备有较高的输出压力、能抗化学腐蚀、泵的死体积要小、操作与检修方便等条件 。
梯度淋洗装置
对于复杂样品,组分的k(容量因子)值范围很宽,采用等度洗脱时往往不能满足要求,可采用梯度洗脱,即在分离过程中,组成流动相的是两种或两种以上的不同溶剂,按一定程序连续改变配比、极性、PH值和离子强度,从而达到提高分离效果和分析速度的目的,梯度洗脱技术类似于气相色谱中的程序升温技术 。
进样装置
进样装置的作用是把分析样品有效地送入色谱柱中进行分离 。由于高效液相色谱柱子较短,固定相颗粒较细,进入柱中的样品在流动相中扩散越迅速,则色谱峰就越宽,因此,进样时要求样品在到达柱头前,不与流动相混合,直接注射到柱头中心即所谓“点进样” 。进样方式通常有:隔膜进样、停留进样、阀进样和自动进样等 。
色谱柱
色谱柱是色谱分离的核心部分,分离效果的好坏主要决定于色谱柱的性能 。通常采用填充柱,即按一定的方法把固定相填入柱中,色谱柱由色谱柱管和填充的固定相组成,固定相是色谱分离的关键部分 。对色谱柱管的要求是耐高压、耐腐蚀 。一般采用厚壁的玻璃管或内壁经过抛光的不锈钢管制成,常用的柱内径为1~6nm,柱长10~30cm,柱子的形状为直形柱,柱子的尺寸及形状的选择要考虑填充的难易和柱效的高低 。
检测器
高效液相色谱对检测器的要求是灵敏度高、重现性好、线性范围宽、噪声低、定量准确、对温度和流量的变化不敏感等,衡量检测器性能的一些标准一般仍沿用气相色谱检测器的表示方法 。高效液相色谱的检测器一般分为两类:一类是通用型检测器(即总体性检测器),它对试样和流动相总的物理或化学性质有响应,属于这类检测器的有示差折光检测器和电导检测器 。这类检测器使用范围广,但是由于它对溶剂(流动相)也有响应,因此易受温度、流量变化的影响,造成较大的噪声和漂移,不能用于梯度淋洗,灵敏度较低,不适合痕量分析 。另一类是选择性检测器(溶质性检测器),它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应,对流动相无响应或响应很小,如紫外吸收检测器和荧光检测器等都属于这一类 。该类检测器灵敏度高,受外界影响小,可用于梯度淋洗,但应用范围受到限制 。

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